自从 1989 年推出首款开创性 P/ACE™ 系统以来,我们在毛细管电泳技术领域一直处于领先地位。我们的研发成果包括硬件、软件和化学品,我们已实现了许多技术进步,包括激光诱导荧光、二极管阵列检测和先进的毛细管电泳数据精简。我们始终以客户反馈为导向,持续提升领导力,关注开发新方法,力求将核心技术应用到关键分析解决方案中。
手性分子的分离给我们带来了独特的挑战。在对称环境中,对映体的化学和物理性质相同(除平面偏振光旋转外)。解析这些分子的关键是构建适当的手性环境。
使用高硫酸化环式糊精进行毛细管电泳分离
手性分子的分离给我们带来了独特的挑战。在对称环境中,对映体的化学和物理性质相同(除平面偏振光旋转外)。解析这些分子的关键是构建适当的手性环境。
使用含有手性添加剂的分离缓冲液填充毛细管,可以在毛细管电泳中轻松实现这一目的。虽然很多手性选择剂已被成功使用,最全面的分离策略还是通过高硫酸化环式糊精 (HSCD) 实现的,高硫酸化环式糊精是一个系列中的三种手性试剂。
在当今毛细管电泳可用的手性选择剂中,高硫酸化环式糊精 (HSCD) 似乎不仅具有最全面的选择性,同时还提供最快的分离速度和最短的方法开发时间。因此,开发手性分离方法时建议先尝试 HSCD。
全新的手性方法开发试剂盒包含全部三种高硫酸化环式糊精 (HSCD) 和一份方法开发协议,可以使用协议确定最适合您的手性分析物的分离条件。该协议可用于各种对映体结构,而且对我们已分析的 90% 以上的化合物都实现了成功的分离 - 请参见药物清单。实际上,使用高硫酸化环式糊精 (HSCD) 进行毛细管电泳已被证明是快速手性分离和单一对映体制备分析级纯度评估的理想分析工具。
手性方法开发试剂盒中的高硫酸化环式糊精 (HSCD) 包含三种环式糊精(α-、β- 和γ-)以及附着的硫酸基团。每个 α-、β-和γ-环式糊精分子中硫酸的平均数量分别为 11、12 和 13。这种分布经过专门设计,可以在试剂盒确定的分离条件下提高分辨率。高硫酸化环式糊精 (HSCD) 带负电,在毛细管电泳环境中有向正电极(阳极)迁移的强大电泳淌度。手性方法开发包中提供的低 pH 值缓冲液 (pH 2.5) 可以抑制毛细管中的电渗流 (EOF)。因此,如果对映体分析物与高硫酸化环式糊精 (HSCD) 相互作用,则无论电荷状态如何,都会被扫至阳极。这是高硫酸化酸环式糊精 (HSCD) 介导的手性分离的基本原则。在试剂盒确定的条件下,中性化合物将与高硫酸化环式糊精 (HSCD) 的疏水腔相互作用,而碱性化合物(在低 pH 值下具有很强的阳离子性)在与疏水腔相互作用的同时,还会与带负电的硫酸盐发生离子反应。在 pH 值为 2.5 时,两性离子分析物将带正电,其表现类似于碱性化合物,而酸性化合物主要进行质子化,表现类似于中性化合物。我们的经验表明,在低 pH 值缓冲液中使用高硫酸化环式糊精 (HSCD) 可实现大多数的手性分离。
高硫酸化环式糊精 (HSCD) 是环式糊精的一种特有分布,α-CD 中的硫酸盐的平均数量为 11 个,β-CD 中为 12 个,γ-CD 中则为 13 个。这种分布经过专门设计,可以在确定的分离条件下提高分辨率。在分析制药和生物行业中的很多中性、碱性和弱酸性化合物时,这些产品表现良好。为确保批次间一致性,我们开发出一种流程,此流程能够以高硫酸化环式糊精 (HSCD) 20% w/v 溶液的形式生成最终产物。我们的流程与非常严格的质量控制程序结合,可以确保所有批次一致达到黄金标准的要求。鉴于当前的高电流运行条件,建议仅将此流程与我们的毛细管电泳系统搭配使用。只有我们的毛细管电泳系统可以对毛细管进行循环液体冷却,进而控制焦耳热量。
注:由于联邦法规规定,我们无法继续提供测试混标。
由于高硫酸化环式糊精 (HSCD) 似乎不仅具有最全面的选择性,同时还提供最快的分离速度和最短的方法开发时间,建议首先使用这些带电环式糊精开发手性方法。这种通用的方法开发策略首先涉及到筛分化合物,以便使用全部三种高硫酸化环式糊精 (HSCD)(α、β 和 γ)进行分离,然后优化可以生成最佳分辨率的手性选择剂。我们的高硫酸化环式糊精 (HSCD) 经验表明,绝大多数分离可在低 pH 值条件下实现。在这些受抑制的电渗流 (EOF) 条件下,带负电的环式糊精有向正电极(阳极)迁移的强大电泳淌度。如果对映体与这些高硫酸化环式糊精 (HSCD) 相互作用,则无论电荷状态如何,都会被扫至阳极。中性化合物将与高硫酸化环式糊精 (HSCD) 的疏水腔相互作用,而碱性化合物(在低 pH 值下具有很强的阳离子性)在与疏水腔相互作用的同时,还会与带负电的硫酸盐发生离子反应。在 pH 值为 2.5 时,酸性化合物将主要进行质子化,表现类似于中性化合物。两性离子分析物将带正电,其表现类似于碱性化合物。
» 下载手性分析方法、序列、示例数据文件和用户指南。
推荐为高硫酸环式糊精 (HSCD) 手性方法开发使用带有液体毛细管冷却和二极管阵列 (PDA) 检测功能的 P/ACE™ MDQ Plus CE 系统。高硫酸化环式糊精 (HSCD) 会生成高电流,且需要有效的毛细管温度调节;因此,要实现快速、高效的手性分离,需要使用 P/ACE™ MDQ CE 系统的高级液体冷却功能。对映体在对称环境中具有相同的理化性质,而且将产生相似的吸收光谱。因此,光谱分析对鉴定对映体以及与污染物区分方面非常有用。带有二极管阵列 (PDA) 检测功能的 P/ACE™ MDQ 将提供这种宝贵的光谱数据。P/ACE™ MDQ CE 系统支持各种进样格式(包括 96 孔板),这使得此系统可与诸多形式的实验室自动化兼容。
通过运用以下策略,我们的科学家在一项独立研究中可以对初始屏幕上 135 种随机选择的手性化合物中的 131 种进行解析,以 2 或更大的分辨率解析 101 种碱性化合物中的 94 种。